琥珀安神丸是由地黃、當(dāng)歸、五味子、柏子仁等十八味藥材組成的復(fù)方制劑，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)》，五味子為方中主藥，具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心的功能。用于久嗽虛喘，夢(mèng)遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗，盜汗，津傷口渴，短氣脈虛，內(nèi)熱消渴，心悸失眠等病癥，與本品的功能主治有密切關(guān)系。原標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測(cè)定的方法，為了更有效地控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)選用反相高效液相色譜法測(cè)定五味子藥材中五味子醇甲的含量，具有操作簡(jiǎn)便，合理、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，可作為控制琥珀安神丸內(nèi)在質(zhì)量的定量指標(biāo)。

    1儀器與試藥

    日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；島津UV-2450紫外分光光度計(jì)；KQ-100型超聲波清洗器；五味子醇甲對(duì)照品（批號(hào)171242-200404購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純；琥珀安神丸（吉林省某藥業(yè)生產(chǎn)）。

    2方法

    2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取五味子醇甲對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含11.02μg的溶液。

    2.2供試品溶液的制備取本品（批號(hào)20060201）重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪成長(zhǎng)約5mm的碎條，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液2ml，置中性氧化鋁柱（100～200目，1.5g，內(nèi)徑1cm）上，用50％甲醇洗脫，收集洗脫液約9ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。

    2.3色譜條件

    2.3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇取對(duì)照品溶液，依法用島津UV-2450紫外分光光度計(jì)在200～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果五味子醇甲在250nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇250nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

    2.3.2系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)分別采用色譜柱：（1）漢邦C18（4.6mm×250mm，5μm）；（2）迪馬鉆石C18（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-水（65∶35）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，柱溫30℃。精密吸取對(duì)照品溶液10μl，供試品溶液20μl分別注入液相色譜內(nèi)，測(cè)得對(duì)照品與供試品的五味子醇甲色譜峰的理論板數(shù)分別為：（1）8537，9515；（2）5821，7734.由此確定合理的理論板數(shù)，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于3000.

    2.4方法學(xué)考察

    2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密吸取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μl，分別注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為Y=-257.2＋2580880X（r=1.0000）結(jié)果表明五味子醇甲在0.02204～0.1102μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

    2.4.2陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)按供試品溶液制備方法，制成不含五味子藥材的陰性對(duì)照溶液。吸取該溶液20μl，注入液相色譜內(nèi)，依法測(cè)定結(jié)果，在與五味子醇甲色譜峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無干擾峰出現(xiàn)。

    2.4.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，在0、5、10、15、20h，分別進(jìn)樣20μl，按五味子醇甲色譜峰面積計(jì)，峰面積平均值為230502，RSD為1.2%.結(jié)果表明20h內(nèi)供試品中的五味子醇甲的含量穩(wěn)定。

    2.4.4精密度實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得五味子醇甲色譜峰面積的平均值為235940，RSD=1.0%.測(cè)定結(jié)果表明該方法精密度良好。

    2.4.5重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一供試品，按供試品溶液制備方法，平行制備6份，對(duì)照品溶液進(jìn)樣10μl，供試品溶液進(jìn)樣20μl，依法測(cè)得樣品中五味子醇甲含量的平均值為0.122（mg/g），RSD=1.5%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

    2.4.6回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取經(jīng)同法測(cè)定，已知含量的供試品2.5g（批號(hào)為20060201，含量為0.112mg/g）6份，分別精密加入新配制的五味子醇甲對(duì)照品溶液（12.92μg/ml）25ml，按供試品溶液的制備方法制備，對(duì)照品溶液進(jìn)樣10μl，供試品溶液進(jìn)樣20μl，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，五味子醇甲的平均回收率為98.0％，RSD=0.9％。結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確可行。

   2.4.7樣品測(cè)定結(jié)果取5批琥珀安神丸樣品，分別按供試品溶液制備方法制備。對(duì)照品溶液進(jìn)樣10μl，供試品溶液進(jìn)樣20μl，每批測(cè)定2次，五味子醇甲的平均含量見表1.表1樣品測(cè)定結(jié)果

    3討論

    在供試品溶液的制備過程中，首先對(duì)加入溶劑的量進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，取供試品5g，2份，分別加入5倍量和10倍量的甲醇，依本文所述的方法處理并依法測(cè)定，結(jié)果基本一致。但是加入10倍量甲醇的供試品中的五味子醇甲色譜峰面積大小，與對(duì)照品色譜峰的峰面積相差過大，會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此選用5倍量為好。另外在制備供試品溶液時(shí)，還對(duì)是否用中性氧化鋁柱處理進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，首先選用供試品加溶劑超聲處理，濾過后直接上樣的方法，然后再用本文所述的上中性氧化鋁柱的方法，兩者所測(cè)得的結(jié)果基本一致，但未經(jīng)中性氧化鋁柱處理的供試品，色譜圖上顯示雜質(zhì)多，并在五味子醇甲色譜峰附近有雜質(zhì)峰干擾，會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此選用了上中性氧化鋁柱的方法。

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