膀胱
腫瘤居泌尿系腫瘤第一位,易復(fù)發(fā),盡管對保留膀胱患者行膀胱灌注治療,但仍存在高復(fù)發(fā)率,尚未有令人滿意的藥物。中醫(yī)藥在治療、康復(fù)、養(yǎng)生等方面具有獨特的優(yōu)勢,但在防治膀胱腫瘤的研究尚不多見。近年來研究發(fā)現(xiàn),龍鑫甘(
苦參素)能抑制
乳腺癌、
肺癌及
胃癌等細(xì)胞生長。還未見有對膀胱腫瘤抑制作用的報道。現(xiàn)通過龍鑫甘作用于體外培養(yǎng)的T24細(xì)胞,研究龍鑫甘在不同濃度和不同時間下對T24細(xì)胞的抑制作用及其相關(guān)機制。
MTT法研究龍鑫甘(苦參素)不同濃度作用不同時間對T24細(xì)胞的抑制作用,光鏡及電鏡下觀察龍鑫甘(苦參素)對T24細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,F(xiàn)CM分析T24細(xì)胞藥物處理前后周期改變及有無凋亡細(xì)胞。
采用免疫細(xì)胞化學(xué)法,研究與T24細(xì)胞凋亡密切相關(guān)癌基因和抑癌基因:P53、 Bcl-2、Bax等蛋白的表達(dá),Bcl-2/Bax比值以及凋亡相關(guān)蛋白酶Caspase-3變化,探討龍鑫甘(苦參素)誘導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡的機制。
MTT法觀察到0.625mg/ml~10mg/ml的龍鑫甘(苦參素)對T24細(xì)胞作用72h后的抑制率為13.75~91.03%,呈時間和劑量依賴性,IC50為1.82mg/ml。1.25mg/ml龍鑫甘(苦參素)作用72h后,光鏡下見細(xì)胞體積縮小,胞質(zhì)濃縮,胞核凝聚,位于核周膜成新月狀。電鏡下癌細(xì)胞核漿比例縮小,核仁減小,與臨近細(xì)胞的連接喪失,失去微絨毛,細(xì)胞膜內(nèi)陷細(xì)胞分割成為多個凋亡小體。龍鑫甘(苦參素)2.5mg/ml作用72h后,見到大量壞死細(xì)胞,呈氣球樣改變,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器腫脹破壞崩解。FCM檢測顯示,陰性對照組G0/G1期43.31%,S期54.10%,G2/M期2.59%; 1.25mg/ml龍鑫甘(苦參素)作用72h后分別是54.52%, 44.42%,1.06%,凋亡率是5.37%;2.5mg/ml龍鑫甘(苦參素)作用72h后是52.41%,40.59%,6.99%,未能分析出調(diào)亡峰。
免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果顯示:對照組T24細(xì)胞P53陽性率為76.25%,Bcl-2為64.38%,Bax為27.38%,Caspase-3為18.13%;1.25mg/ml龍鑫甘(苦參素)作用72小時后,分別是25.75%,27.13%, 58.25%, 38.5%,與對照組相比其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
綜上所述,可以看出龍鑫甘(苦參素)對T24細(xì)胞生長有抑制作用,從濃度1.25mg/ml起就有明顯抑制作用,10mg/ml龍鑫甘(苦參素)的抑制率可達(dá)91.03%,呈時間劑量依賴性?鄥⑺乜烧T導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡,1.25mg/ml苦參素作用72h后,光鏡及電鏡下均可見典型的凋亡細(xì)胞;2.5mg/ml苦參素作用72h后見大量壞死細(xì)胞。FCM檢測到藥物處理后T24細(xì)胞出現(xiàn)G0/G1周期阻滯, S期細(xì)胞較陰性對照組明顯下降,并且有凋亡峰出現(xiàn)。龍鑫甘(苦參素)作用于T24細(xì)胞后,P53蛋白和Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào), Bax蛋白表達(dá)上調(diào),減小Bcl-2/Bax的比值,上調(diào)Caspase-3的表達(dá),誘導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡。