尖銳濕疣皮損區的免疫狀態與免疫治療療效的關系

    【摘要】  目的 研究尖銳濕疣患者皮損區的免疫狀態與免疫治療療效的關系。方法  觀察5%咪喹莫特乳膏治療3O例尖銳濕疣的臨床療效，并采用免疫組化方法檢測治療前皮損區人類白細胞抗原-DR(HLA-DR)、CDla、CD16、細胞間粘附分子-1(ICAM-1)的表達。結果 治療后8周，2O例(66.7)患者有效。咪喹莫特治療有效者，治療前其皮損HLA-DR、CDla、CD16及 ICAM-1陽性表達明顯多于無效者(P<0.05)。結論  尖銳濕疣皮損處HLA-DR、CDla、CD16及ICAM-1陽性表達多者提示免疫治療有效。

 

    尖銳濕疣是人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起的一種性傳播疾病，其自然病程個體差異很大，一般認為其發生、轉歸與機體的免疫狀態有關，因此臨床上常采取免疫調節治療。然而，患者對免疫治療的反應亦存在個體差異。樹突狀細胞、自然殺傷細胞(NK細胞)及粘附分子參與了皮膚的免疫應答。為了進一步研究尖銳濕疣患者的免疫狀態及其與免疫治療的關系，我們觀察了5%咪喹莫特乳膏治療尖銳濕疣的臨床療效，并檢測了尖銳濕疣皮損區人類白細胞抗原-DR(HLA-DR)、CDla、CD16、細胞 間粘附分子-1(ICAM-1)表達的情況。

 

    1.1 研究對象及治療方法

    30例尖銳濕疣患者，來自我科門診，男19例，女11例，年齡21～60歲，平均36.5歲，病程15 d至90 d，平均26 d。治療前取疣體活檢。治療方法：用5%咪喹莫特乳膏(商品名明欣利迪，四川明欣藥業有限公司生產)，涂一薄層于外生殖器和肛周尖銳濕疣皮損處，按摩數次，每周3次，療程8周。在試驗期間禁止使用抗病毒藥和其它免疫調節劑。

 

    1.2 免疫組化方法

    免疫組化法采用標準SP法染色。HLA-DR、CD1a、CD16、ICAM-1單克隆抗體為美國 Santa Cruz公司產品。抗體稀釋度均為1：100。主要操作步驟：切片裱于經APES處理的清潔載玻片上，置60℃孵箱烤4～6h，常規脫蠟水化，滴加第一抗體，37℃，1 h。滴加生物素標記的二抗，37℃，30 min。滴加過氧化酶標記的鏈親合素，37℃，30 min后DAB顯色，蘇木素復染封片。以上各步間均用 0．01 mol／L PBS(pH 7.4)沖洗3次，每次5 min。以正常淋巴組織作陽性對照，空白對照以PBS代替一抗，余同前。

 

    1.3 結果判斷

 

    判斷標準參見文獻^[1]。臨床療效：療效指標為疣件的數 目和總面積，按照痊愈、顯效、進步、無教四級標準評價。痊愈：疣體完全消退；顯效：60%≤疣體面積減少<1O0%；進步：2O%≤疣體面積減少<60%；無效：疣體面積減少<20%或繼續加重。將痊愈和顯效病例合計計算有效率。

 

    免疫組化結果判定：以染色強度和染色范圍之和為每種標記的總分數。染色強度：0分為無染色；1分為弱陽性；2分為中等度陽性；3分為強陽性。染色范圍：0分為偶見陽性；1分為片狀陽性；2分為廣泛陽性。

 

    1.4 統計學方法

    采用 Wilcoxon秩和檢驗，雙側。a＝0.05為檢驗水準。

 

    2.1 臨床療效

    治療后8周，15例患者痊愈，5例顯效，痊愈率為50%，有效率為66.7%。

 

    2 2 皮損 逸 HLA—DR、CDIa CDI6、ICAM 1的表達

 

    HLA-DR、CDla、ICAM-1陽性細胞主要分布于表皮棘細胞層和基底層，陽性表進部位位于細胞膜或細胞漿；CD1 6陽性細胞位于真皮層，表達部位在細胞膜(圖1～4)咪喹奠特治療有效者，治療前其皮損區HLA-DR、CDla、CD16及ICAM-1陽性表達明顯多于無效者，見附表。

 

    圖1 尖銳濕疣皮損區HLA-DR陽性樹突狀細胞位于表皮基底層和棘細胞層，表達部位在細胞膜/細胞漿。SP×400

 

    圖2 尖銳濕疣皮損區CD1a陽性樹突狀細胞位于表皮基底層和棘細胞層，表達部位在細胞膜/細胞漿。SP×400

 

    圖3 尖銳濕疣皮損區CD16陽性細胞位于真皮層，表達部位在細胞膜。SP×400

 

    圖4 ICAM-1在尖銳濕疣表皮基底層和棘細胞層的角質形成細胞胞膜陽性表達。SP×400

 

      A: Responders to imiquimod; B: Monresponders to imiquimod

 

    附表  咪喹莫特治療尖銳濕疣有效者和無效者各標記染色分數的比較

 

 

 

    咪喹莫特是一種人工合成的新型的免疫調節劑，可誘導人單核細胞、樹突狀細胞和角質形成細胞產生干擾素(IFN)-a、腫瘤壞死因子(TNF)-a和白介素 IL-1、IL-6、IL-8、IL-12，刺激機體的免疫系統發生針對感染 HPV細胞的Thl型免疫應答，最終清除感染的病毒^[2]。HLA-DR及 CDla都是樹突狀細胞的表面標志。樹突狀細胞是表皮中至關重要的抗原遞呈細胞，并參與細胞激活和免疫監視^[3]。有研究^[4]表明，尖銳濕疣患者存在局部免疫缺陷，表現為皮損部位 CD4、CDla陽性細胞數目減少。本研究發現，瞇喹莫特治療有效者，治療前其皮損 HLA-DR、CDla陽性表達明顯多于無效者，與文獻報道^[5，6]其它的免疫調節劑如干擾素、疫苗結果相似。對于咪喹莫特治療抵抗者，由于抗原遞呈細胞的低密度，導致在咪喹莫特治療時細胞因子生成不足，難以激活局部的免疫反應，故治療無效^[7]。

 

    CD16是人類NK細胞 的表面標志。NK細胞是天然免疫和獲得免疫的效應細胞，其表面的膜蛋白CD16有細胞粘附作用。NK細胞借助其表面的CD16，結合并殺傷靶細胞(病毒感染細胞)。NK細胞還可釋放r-干擾素、TNF-a、IL-1等細胞因子，調節免疫應答。病毒可激活NK細胞。有研究^[4，6]表明，尖銳濕疣患者存在局部免疫缺陷，其皮損部位CD16陽性細胞數目減少；干擾素治療有效者的皮損處CD16陽性細胞明顯多于無效者。本研究發現，咪喹莫特治療有效者，治療前其皮損CD16陽性表達明顯多于無效者，提示在尖銳濕疣患者，HPV不能有效激活NK細胞以及相應的免疫應答，對HPV感染細胞的殺傷能力較弱，從而導致尖銳濕疣皮損的出現并持續存在，免疫治療難以奏效。

 

    ICAM-1(CD54)屬于免疫球蛋白超家族。正常情況下，ICAM-1很少表達或不表達。受到炎性細胞因子如 TNF-a等的刺激時，可表達于多種細胞表面例如活化的T細胞、內皮細胞、表皮角質形成細胞，參與免疫應答和免疫調節以及炎癥反應，并參與免疫細胞識別和調節細胞凋亡^[3]。咪喹莫特治療有效者，治療前其皮損ICAM-1陽性細胞明顯多于無效者。皮損區ICAM-1表達的上調可促進白細胞移行至血管外，粘附于角質形成細胞，并且通過與淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1)相互作用活化T淋巴細胞 。

 

    綜上，咪喹莫特治療尖銳濕疣有效者的皮損區HLA-DR、CD1a、CD16及ICAM-1陽性表達明顯多于無效者，提示 局部皮損處 HLA-DR、CDla、CD16及 ICAM-1陽性表達多的尖銳濕疣患者對免疫治療有效。

   

    1  Coleman N ·Birley HDL，Renton AM ，et a1．Immunological events in regressing genital warts．Am J Clin Patho1．1998 I 102 (6)t768．

 

    2  Sauder DN． Immunomod ulatory and pharmacologic properties of imiquimod． J Am Acad Dermatol。2000；43(1)lS6．

 

    3  龔非力主編．基礎免疫學．武漢：湖北科學技術出版社。1998： 24-173．

 

    4  Arany I,Evans T, Tyring SK．Tissue specific HPV expression and d0wnreguIati0n of local immune responses in condylomas from HIV seropositive individuals．Sex Transm Infect，1998 l 74(5)t349．

 

    5  Davidson EJ, Boswell CM, Sehr P,et a1．Immunological and clinical responses in women with vulval intraepithelial neoplasia vaccinated with a vaccinia virus encoding human papillomavirus 16／18 oncoproteins．Cancer Res,2003I63(18)l 6032．

 

    6  Arany I．Tyring SK．Activation of local cell-mediated immunity in interferon-responsive patients with human papillomavirus-associated lesions． J Interferon Cytokine Res,1996I16(6)l453．

 

    7  Arrese J,Paquet P,Claessens N,et a1．Dermal dendritic cells in anogenital warty lesions unresponsive to an immune—response modifier．J Cutan Pathol,2001,28(3) 131．