HPLE測定食道平散有效成分的含量

    食道平散為中藥復(fù)方制劑，主要由人參、西洋參、全蝎、蜈蚣、細辛、三七等十余種中藥組成，具有益氣破瘀，解毒散結(jié)等功效。食道平散用于中晚期食管癌而致食管狹窄梗阻，吞咽困難，疼痛等癥。食道平散原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)用比色法測定人參皂苷Re的含量，其有費時，重現(xiàn)性差，精密度低等不足。我們參照相關(guān)文獻，采用高效液相色譜法（HPLE）對食道平散制劑中人參、西洋參、三七所含成分人參皂苷Rg1和Re進行了測定，該方法簡便、快速而準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，能更好地控制該制劑的質(zhì)量。
 
1 儀器與試藥 
    1.1 儀器：島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，SPD-10AVP紫外檢測器。色譜工作站。 

 
    1.2 試藥：乙腈為色譜純（美國TEDIA），其它試劑均為分析純。人參皂苷Rgl和Re對照品（批號0703-200120和0754-9809，中國藥品生物制品檢定所提供.供含量測定用）。食道平散由西安金龜壽藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果 
    2.1 色譜條件：色譜柱：島津VP-ODS色譜柱（150 mm×4.6mm，5 urm）；流動相：乙腈5g/L：磷酸溶液（19.5：80.5）；檢測波長203 nm；柱溫：室溫；流速：1.3 ml/min。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rgl計算應(yīng)不低于5000。

  
    2.2 溶液的制備 
    2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1、Re對照品適量，加甲醇制成每1 m1分別含0.5 mg、0.2 mg的溶液，即得。

 
    2.2.2 供試品溶液的制備 取食道平散2.0g，精密稱定，置索氏提取器中。加乙醚適量，加熱回流4小時，取出濾紙筒，揮干乙醚，連同濾紙置具塞三角瓶中，加正丁醇飽和水1ml使?jié)駶櫍�精密加入水飽和的正丁�?0 ml。稱定重量，超聲處理30分種，放置過液，再超聲處理30分鐘，放冷，稱定重量，用水飽和的正丁醇補足減失的重量，搖勻。靜置，取上清液濾過，精密吸取續(xù)濾液25ml，加氨試液洗滌2次，每次20 rnl，棄去洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，并定量轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45um的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。 

 
    2.2.3 空白對照溶液的制備：按處方比例工藝制得不含人參、西洋參、三七的陰性樣品，按供試品液的制備方法制備溶液。分別取上述三種溶液10 注入高效液相色譜儀，按色譜條件測定吸收峰面積，其HPLC圖譜分別見圖1、圖2、圖3。（略）

 
    2.3 線性關(guān)系考察：精密稱取人參皂苷Rg1、Re對照品25.60mg、10.85 mg，加甲醇稀釋至5 ml，分別吸取上述溶液0.05、0.1、0.2、0.5、l.0 ml， 加甲醇定容于2 rnl容量瓶中分別吸取10ul。按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，人參皂苷Rg1、Re的量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，人參皂苷Rg1在1.28～51.6 ug范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=82668X-1689，r =0.9999；人參皂苷Re在0.54~21.7 g范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=72145X-2544，r=0.9999。

 
    2.4 精密度試驗：精密吸取上述食道平散對照品溶液10 ul，重復(fù)進樣5次，按上述色譜條件測定峰面積，結(jié)果人參皂苷Rg1和Re的峰面積中RSD分別為0.99％和2.0％。

 
    2.5 重現(xiàn)性試驗：取同一批號食道平散樣品5份，按上述色譜條件操作，測得人參皂苷Rgl的平均含量為5.089 mg/g，RSD=I.67％；人參皂苷Re的平均含量為1.321 mg/g，RSD=1.69％。

 
    2.6 穩(wěn)定性試驗：取同一食道平散供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、1、4、8、24小時測定峰面積積分值，結(jié)果表明。食道平散供試品溶液液在24內(nèi)基本穩(wěn)定.其人參皂苷Rgl和Re的RSD分別為1.39％和2.52％。

 
    2.7 回收率試驗：精密稱取已知含量的食道平散供試品適量，精密加入一定量的對照品，按供試品溶液制備的方法，制備待測液，按上述色譜條件操作。測定峰面積，計算舍量和回收率，結(jié)果見表l、表2。（略）

 
    2.8 樣品測定：精密稱取樣品，按上述色譜條件操作，測量結(jié)果見表3。（略）

 
3 討論 
    在食道平散供試品溶液制備考察時，對提取溶劑、超聲次數(shù)和時間等均進行了比較實驗，最終確定為減少脂溶性雜質(zhì)干擾，選擇乙醚回流脫脂：因西洋參、三七藥材組織堅實具角質(zhì)化，選擇水飽和的正丁醇超聲提取2次，為了避免黃酮類成分的干擾而采用堿洗的凈化方法。經(jīng)實驗表明，食道平散該檢驗人參皂苷的方法簡便、有效，能滿足含量測定的要求。

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