恩博克®乳膏

（抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體乳膏）

研究資料匯編

 

    銀屑病（psoriasis）是在特定遺傳背景下，通過多種因素而誘導(dǎo)而發(fā)生的慢性炎癥性皮膚病。在不同地區(qū)和人群中銀屑病的發(fā)病率有很大差異。白種人群的發(fā)病率超過2%，極端的接近5%。黃種人群的發(fā)病率較低，我國銀屑病科研協(xié)作組在1984年的調(diào)查結(jié)果表明，銀屑病的發(fā)病率為0.123%，其中尋常型銀屑病占97.98%，膿皰型和關(guān)節(jié)型均為0.69%，紅皮病型為0.58%，但多數(shù)皮膚病專家認(rèn)為近幾年銀屑病的發(fā)病率有增加的趨勢。

銀屑病自Willan和Henra命名以來已有200多年的歷史，由于其發(fā)病機(jī)理仍然不清楚，導(dǎo)致雖然用于治療銀屑病的藥物眾多，但治療效果均不理想，且容易復(fù)發(fā)。

恩博克乳膏（抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體乳膏）是根據(jù)近年來銀屑病發(fā)病機(jī)理的最新研究結(jié)果，即銀屑病的病患局部細(xì)胞因子水平異常使得出現(xiàn)皮膚銀屑病的病理變化的機(jī)理，而研制的特異治療銀屑病的藥物。恩博克乳膏（抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體乳膏）可使銀屑病病患局部細(xì)胞因子水平恢復(fù)正常，消除銀屑病的病理變化，在細(xì)胞因子水平上達(dá)到有效治療銀屑病的目的。

 

    恩博克乳膏（抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體乳膏）治療銀屑病的機(jī)理為，通過恩博克乳膏（抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體乳膏）中的抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體中和銀屑病病變局部異常增高的白細(xì)胞介素-8的生物學(xué)活性，封閉異常增高的白細(xì)胞介素-8的病理生理功能，在細(xì)胞因子水平上達(dá)到有效治療銀屑病的目的。

    在銀屑病病變局部的皮膚中，白細(xì)胞介素-8的水平為正常皮膚的100余倍。白細(xì)胞介素-8是細(xì)胞因子中稱之為化學(xué)趨向因子（或趨化因子）的一種蛋白分子，在趨化因子大家族中，按照它們分子結(jié)構(gòu)中的半胱氨酸位置可分為C-X-C類趨化因子和C-C類趨化因子。白細(xì)胞介素-8屬于C-X-C類趨化因子，它是由72個(gè)氨基酸組成的，分子量為8000左右。白細(xì)胞介素-8是嗜中性粒性白細(xì)胞的強(qiáng)烈趨化和激活因子，能強(qiáng)力地匯集并激活嗜中性粒性白細(xì)胞。白細(xì)胞介素-8在許多生理及病理過程中具有廣泛的生物活性，它在炎癥過程中起著關(guān)鍵性的作用。白細(xì)胞介素-8由多種參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞產(chǎn)生，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞等等。它繼而作用于內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，從而形成炎癥反應(yīng)。

    白細(xì)胞介素-8與其在某些細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，使靶細(xì)胞的功能發(fā)生一系列改變，引起一系列前炎癥病理生理反應(yīng)，包括細(xì)胞粘附受體CD11b/CD18 （Mac-1）在中性粒細(xì)胞中表達(dá)增加、增強(qiáng)淋巴細(xì)胞對(duì)人內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，增加中性粒細(xì)胞的趨化性及脫顆粒作用，并促進(jìn)血管生長因子表達(dá)和分泌，形成血管增生等。IL-8因能引起中性粒細(xì)胞浸潤并使其釋放溶酶體和過氧化陰離子而導(dǎo)致或促進(jìn)組織損傷。在人類炎癥性疾病中，IL-8的表達(dá)和分泌明顯增加，特別是病變組織局部濃度過升高，例如，銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性肺纖維化、腸道炎癥、成年人呼吸窘迫綜合性、敗血癥休克等。

白細(xì)胞介素-8作為一種CXC類的化學(xué)趨化因子在銀屑病的病理機(jī)理中，主要有以下關(guān)鍵作用：

      1．白細(xì)胞介素-8在皮膚組織內(nèi)過量表達(dá)和分泌，匯集大量嗜中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和其他炎癥細(xì)胞，對(duì)皮膚組織的浸潤，引起微膿腫和皮膚組織結(jié)構(gòu)的損傷。嗜中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等也可以產(chǎn)生大量IL-8，而使局部病理改變加重，病變遷沿不易治愈。

      2．白細(xì)胞介素-8激活表皮角質(zhì)化細(xì)胞，引起角質(zhì)化細(xì)胞的異常增殖和角化不全，大量細(xì)胞壞死和皮屑脫落。

      3．白細(xì)胞介素-8激活的角質(zhì)化細(xì)胞又在血管生成因子的異常表達(dá)過程起著重要作用。激活的角質(zhì)化細(xì)胞具有正和負(fù)雙向缺陷，既過度產(chǎn)生IL-8使得血管生成因子產(chǎn)生增加，又下調(diào)血管生成抑制因子表達(dá)，使銀屑病灶區(qū)的血管生成處于失控狀態(tài)。大量血管形成為表皮細(xì)胞過量增生提供足夠血液，促進(jìn)了炎癥的快速形成。

      4．白細(xì)胞介素-8的活性是通過它與其在嗜中性粒細(xì)胞或角質(zhì)化細(xì)胞等炎癥性細(xì)胞表面的受體相結(jié)合而介導(dǎo)的。銀屑病病灶區(qū)的角質(zhì)化細(xì)胞和浸潤的嗜中性粒細(xì)胞，不僅本身能產(chǎn)生大量IL-8而且誘導(dǎo)IL-8受體在細(xì)胞表面的表達(dá)引起連續(xù)不斷的惡化循環(huán)，造成持續(xù)不斷越來越嚴(yán)重的皮膚炎癥。

 

    恩博克乳膏中的抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體是一種高效價(jià)特異性針對(duì)白細(xì)胞介素-8的中和性抗體，它能十分專一性地與白細(xì)胞介素-8結(jié)合，封閉白細(xì)胞介素-8的化學(xué)趨向活性等病理生理功能，從而阻斷嗜中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞對(duì)皮膚組織的浸潤，阻斷血管生長因子和血管生成抑制因子在病變局部部位的過量表達(dá)和微血管生成，阻斷表皮角質(zhì)化細(xì)胞的激活和異常增生及壞死，達(dá)到有效治療銀屑病的效果。

      治療用抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體是用基因重組人體單核細(xì)胞來源的白細(xì)胞介素-8（72個(gè)氨基酸組成，分子量為8.0kd）免疫SPF級(jí)Balb/c小鼠，經(jīng)雜交瘤技術(shù)篩選而得到的具有高度親和力并對(duì)I白細(xì)胞介素-8生物活性具有高度中和能力的單克隆抗體，其免疫球蛋白亞型鑒定為IgG1，Kappa型抗體。抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體的生產(chǎn)過程中，嚴(yán)格控制質(zhì)量，保證抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體具有高度生物活性、高純度和無外源污染因子混入，保證銀屑病病患者在使用時(shí)安全有效。

 

    1.  抗白細(xì)胞介素-8單克隆抗體乳膏外用治療銀屑病六周后，病人體內(nèi)HAMA反應(yīng)（人抗鼠免疫球蛋白抗體）的檢測：

    鑒于恩博克乳膏中的抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體是鼠源性單克隆抗體。大量臨床治療資料證明，注射鼠源性單克隆抗體后常常會(huì)引起機(jī)體產(chǎn)生抗鼠免疫球蛋白的反應(yīng)（即HAMA）。因此，外用單克隆抗體的途徑是否也存在HAMA反應(yīng)是必須加以闡明的，這不僅關(guān)系到抗體的療效，也關(guān)系到可能產(chǎn)生的不良副作用。

    我們在II/III期臨床試驗(yàn)時(shí)，對(duì)46例銀屑病病人在治療前和治療6周后的血清進(jìn)行了HAMA檢測，其檢測方法和結(jié)果如下：

 

    （1）HAMA試劑盒試劑（ELISA）。

    （2）HAMA標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：

    用2mL蒸餾水充分溶解HAMA標(biāo)準(zhǔn)品使之濃度為400ng/mL，然后用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，將其作倍比（2 X）系列稀釋至6.25ng/mL,即獲7個(gè)不同濃度之標(biāo)準(zhǔn),供EIA使用。此7個(gè)不同濃度為：400ng/mL，200ng/mL，100ng/mL，50ng/mL,25ng/mL，12.5ng/mL，6.25ng/mL。

    （3）結(jié)果判斷：

    將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為X軸，相應(yīng)OD為Y軸，由此得到HAMA EIA標(biāo)準(zhǔn)曲線，將待測標(biāo)本的OD在此標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到相應(yīng)的濃度，即為該標(biāo)本HAMA EIA結(jié)果，凡結(jié)果低于50ng/mL為陰性結(jié)果。

    46例受測血清中僅一例治療前后均出現(xiàn)HAMA 20ng/mL—30ng/mL，但都在臨界值以下，所以HAMA呈陰性反應(yīng)。其余45例血清均未檢測出HAMA反應(yīng)。

    按照美國NIH報(bào)告，注射鼠源性單克隆抗體治療疾病，最早可在第8天就出現(xiàn)HAMA陽性反應(yīng)（HAMA＞62.5ng/mL為陽性反應(yīng)），一般可在治療后10—14天出現(xiàn)HAMA陽性反應(yīng)。當(dāng)病人體內(nèi)出現(xiàn)抗鼠免疫球蛋白的抗體后，單克隆抗體的治療效果就會(huì)受到影響。而本實(shí)驗(yàn)顯示，單克隆抗體外用治療不出現(xiàn)HAMA反應(yīng)，所以，可以長期安全使用。

    乳膏中單克隆抗體是持續(xù)微量、緩慢地透入表皮皮損組織，與皮損組織中的白細(xì)胞介素-8直接結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物，并可能在皮膚局部被降介或消化。所以，未與白細(xì)胞介素-8結(jié)合的游離態(tài)單克隆抗體或抗原-抗體復(fù)合物進(jìn)行血液中是極為微量的。微量抗體分子持續(xù)、緩慢地進(jìn)入體內(nèi)，可能誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)的免疫“遺漏”或“耐受”，抑制了HAMA的產(chǎn)生。  

 

皮膚刺激性：

    在動(dòng)物試驗(yàn)（家兔、豚鼠）和人體試驗(yàn)中，破損皮膚使用恩博克乳膏后，均無明顯變化，提示恩博克乳膏對(duì)皮膚無刺激性作用和無致敏作用。

 

對(duì)同源性細(xì)胞因子功能的影響：

    特異性鑒定結(jié)果證明，抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體與其他細(xì)胞因子、化學(xué)趨向因子GM-CSF 、TGF-β 、MCAF、TNF-α、 IL-7、 IL-1β、 b-FGF、 IL-16、 MCP-3、 M-CSF、 EGF以及與IL-8結(jié)構(gòu)上同源的細(xì)胞因子GROα、 PF-4、 ENA78、 NAP-2 、GCP2均無交叉反應(yīng)，故抗人白細(xì)胞介素-8單克隆抗體不會(huì)干擾同源性細(xì)胞因子的功能。

 

    II/III期臨床試驗(yàn)表明，外用恩博克乳膏安全性高，患者耐受性好。不良反應(yīng)有局部刺激、紅斑等，多數(shù)呈輕度，不影響對(duì)銀屑病的治療。局部不良反應(yīng)發(fā)生率為7.56%，與對(duì)照組（8.69%）比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。無全身不良反應(yīng)發(fā)生。

 

典型病例

    例1  朱某，男性，48歲，2000年4月24日就診。病史：全身皮膚發(fā)生紅斑、脫屑，輕度癢感已1個(gè)半月。發(fā)病前半個(gè)月曾經(jīng)感冒、發(fā)燒、咽部疼痛。近來因工作緊張病后未曾治療。既往身體健康，從未患過類似疾病，家族中亦無類似疾病發(fā)病史。檢查：軀干、四肢（伸側(cè)為主）散在甲大、指頭大紅斑，輕度浸潤，上覆銀白色鱗屑。薄膜現(xiàn)象，點(diǎn)狀出血現(xiàn)象陽性。診斷：尋常性銀屑病，進(jìn)展期。皮損面積約占體表面積10%左右。病情評(píng)分為9分。予以白細(xì)胞介素—8單抗乳膏（揭盲得知）每日二次，外搽治療。用藥1周后已不癢，鱗屑明顯減少，2周后顯著好轉(zhuǎn)，用藥3周紅斑、鱗屑性皮疹消失，殘留明顯的色素沉著，用藥4周即停止用藥。至第6周色素沉著亦減輕，痊愈（照片NO.54）。療程中無不良反應(yīng)發(fā)生，治療前后進(jìn)行了血、尿常規(guī)、肝腎功能及心電圖檢查，均無異常出現(xiàn)。

    例2  李某，男，59歲，病史：全身皮膚發(fā)生脫屑性紅斑已20年。病程中有時(shí)輕有時(shí)重，但與季節(jié)無明顯關(guān)系。5年前曾接受氨甲喋呤片劑口服治療，約1個(gè)月后皮疹消退，此后未再復(fù)發(fā)。直至4個(gè)月前自己認(rèn)為吃海蝦后復(fù)發(fā)，此后皮疹逐漸增多、擴(kuò)大，有明顯的癢感，既往身體健康，除皮膚病外，未患過其它明顯疾病，本病亦無家族發(fā)病史。檢查：頭皮、上肢、臀部散在與密集指頭大、錢幣大及掌心大小的紅色斑塊，上覆銀白色鱗屑、薄膜現(xiàn)象及點(diǎn)狀出血現(xiàn)象陽性。診斷：尋常性銀屑病，進(jìn)展期，皮損面積約占體表面積10%左右，病情評(píng)分為15分，予以隨機(jī)號(hào)G4的乳膏，每日二次，外搽治療。用藥1周后癢感和鱗屑明顯減輕，4周后已顯著改善，至第6周皮疹基本消退，達(dá)到基本痊愈（照片N0.5）。療程中無不良反應(yīng)發(fā)生。治療前后檢查血、尿常規(guī)、肝腎功能和心電圖，均無異常。揭盲得知為治療藥。

    例3  蔡某，男，51歲，2000年4月5日就診。病史：頸部、上肢鱗屑性紅斑，伴瘙癢2月，2000年2月初，因勞累后，頸部、雙上肢出現(xiàn)散在鱗屑性紅斑，伴瘙癢，每天需搔抓4-6次，此次就診前未治療過。既往體健，家族中無類似病人。檢查；頸部、雙上肢散在黃豆或甲蓋大小紅色斑塊，表面覆蓋較多銀白色鱗屑，輕刮則脫落，再刮有點(diǎn)狀出血。診斷：尋常型銀屑病（小斑塊狀），進(jìn)行期，皮損面積約占體表面積10%，病情評(píng)分為12分。予以抗人白細(xì)胞介素—8乳膏治療（揭盲得知），每日外用2次。6周后，癥狀、體征全部消失，臨床治愈。治療過程中未見不良反應(yīng)，治療前后血、尿常規(guī)，肝腎功能、心電圖無異常。

例4  葉某，女，46歲，2000后3月31日就診。病史：軀干、四肢反復(fù)起鱗屑性紅斑。伴瘙癢8年余。勞累后易復(fù)發(fā)，用過多種中西藥治療，效果不佳。2月前，因發(fā)生婚變，皮疹復(fù)發(fā)，伴劇癢，遂來本院就診。既往體健，家族中無類似病人。查體：軀干、四肢散在鱗屑性紅斑、丘疹，Auspitz征陽性。診斷：尋常型銀屑病，進(jìn)行期，皮損面積約占體表面積20%，病情評(píng)分為14分。予以抗人白細(xì)胞介素—8乳膏治療（揭盲得知），每日外用2次，輕揉數(shù)分鐘。1周后，瘙癢減輕，脫屑減少。4周后病情明顯減輕，疾病評(píng)分為5分；6周后，皮疹消退，僅見色素斑或淡紅斑，癥狀消失，疾病評(píng)分降為3分。治療過程中未見不良反應(yīng)，治療前后血、尿常規(guī)，肝腎功能、心電圖無異常。