環孢素A對早孕期人細胞滋養細胞侵襲與遷移的影響

　　臨床試驗研究環孢素A對早孕期人細胞滋養細胞侵襲與遷移的影響及其信號轉導機制。滋養細胞攜帶來自胎兒的外胚層抗原，是母胎界面唯一與母體免疫系統直接接觸的胎兒細胞，在母胎免疫耐受中發揮重要作用。許多病理性妊娠，如反復自然流產、妊高征及胎兒宮內生長遲緩等均伴有滋養細胞某些生物學功能異常。以CsA作為研究工具，觀察環孢素A對早孕期人細胞滋養細胞侵襲與遷移的影響，并進一步解析其信號轉導機制，對于解析CsA新的藥效機制，具有重要意義。

環孢素A對早孕期人細胞滋養細胞侵襲與遷移的影響

　　目的 探討環孢素A（新山地明）（Cyclosporin A，CsA）對早孕期人細胞滋養細胞及人滋養細胞腫瘤細胞系JAR侵襲與遷移的調控作用。

　　方法 應用硅化聚乙酰胺吡咯烷酮（Percoll）密度梯度離心法，分離純化早孕期人細胞滋養細胞，經免疫細胞化學和流式細胞術鑒定其純度；采用transwell分析早孕期人細胞滋養細胞及人JAR細胞系遷移及侵襲能力；通過Western blot觀察pERK1/2的表達；ELISA分析MAP激酶活性。細胞內共轉染AP-1-Luciferase、NFκB-Luciferase、NFAT-Luciferase與Renilla Luciferase-SV40報告質粒采用熒光素酶報告基因雙檢測系統分析各轉錄因子的啟動子活性。

　　結果

　　（1）早孕期人細胞滋養細胞在含0.001，0.01，0.1，1.0μmol/L CsA的細胞培養液中分別培養24h、48h及72h時遷移、侵襲能力均增強；以1.0μmol/L的CsA促進作用最強，其中培養48h，CsA作用最顯著。而CsA濃度達10.0μmol/L時，細胞滋養細胞的侵襲能力下降。CsA條件性培養基也能增強細胞滋養細胞的遷移能力與侵襲性，且其作用強于CsA組；CsA及其條件培養基對JAR細胞系有類似的作用。

　　（2）TGF-β1、TGF-β2可抑制細胞滋養細胞固有的和CsA誘導的侵襲與遷移能力，TGF-β1中和性抗體可增強細胞滋養細胞自身或CsA誘導的侵襲與遷移能力，TGF-β2中和性抗體可增強CsA誘導的細胞滋養細胞侵襲與遷移能力，對細胞滋養細胞自身的侵襲與遷移能力沒有明顯影響。而無論TGF-β1、TGF-β2或其中和性抗體對于JAR細胞系的侵襲與遷移能力均沒有影響。

　　（3）Western blot、ELISA顯示，CsA以時間和劑量依賴方式促進細胞滋養細胞ERK1/2的磷酸化和MAP激酶的活化。U0126預處理可抑制CsA誘導的細胞滋養細胞ERK1/2的磷酸化和MAP激酶的活化。而NFAT抑制劑對CsA誘導的細胞滋養細胞ERK1/2磷酸化和MAP激酶活化無顯著影響。

　　（4）CsA以時間和濃度依賴方式刺激細胞滋養細胞AP1、NF-κB啟動子活性；抑制ionomycin+PMA誘導的細胞滋養細胞NFAT啟動子活化。

　　（5）MEK激酶抑制劑U0126以劑量依賴方式抑制滋養細胞ERK1/2磷酸化和MAP激酶活化的同時，抑制AP1、NF-κB啟動子活性，抑制細胞滋養細胞固有的和CsA誘導的遷移能力與侵襲性。NFAT抑制劑單獨或與CsA合并使用都會促進細胞滋養細胞遷移與侵襲能力。但NFAT抑制劑單獨應用作用低于CsA或CsA與NFAT抑制劑合并使用。

　　結論

　　（1）CsA呈時間劑量依賴方式活化MAPK/ERK1/2信號通路，促進早孕期人細胞滋養細胞的體外侵襲、遷移能力。

　　（2）抑制細胞滋養細胞Ca2+/Calcineurin/NFAT信號通路是CsA促進滋養細胞遷移能力與侵襲性的重要機制之一。

　　（3）CsA誘導的轉錄因子AP-1、NF-κB活化可能參與CsA對細胞滋養細胞體外生長的調控作用。

　　（4）AP-1、NF-κB可能是CsA活化的細胞滋養細胞MAPK/ERK1/2信號通路下游的轉錄因子。

　　（5）CsA誘導的MAPK/ERK1/2信號活化獨立于NFAT核轉位以及NFAT轉錄活性；CsA抑制的NFAT活性也不依賴于MAPK/ERK1/2信號活性。

　　（6）CsA對細胞滋養細胞的促侵襲、遷移能力可能不是通過TGFβ介導。

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