白癜風噬菌體抗體庫構建成功

來源：中國醫藥報作者：百濟瀏覽：發布時間：2006/11/24 11:54:00

近日，第四軍醫大學西京醫院皮膚科劉玲碩士等在完成的一項國家自然科學基金資助課題中，采用細胞內PCR擴增抗體基因的方法，成功構建一庫容量為3×106白癜風的噬菌體抗體庫。該抗體庫的建立，為進一步研究自身抗體在白癜風發生發展過程中的作用及其治療提供了嶄新的思路。

據介紹，白癜風是一種常見的皮膚色素脫失性疾病。近年來有研究表明，白癜風與自身免疫密切相關，其患者體內存在抗黑素細胞膜自身抗體，導致黑素細胞破壞，引起自身損傷。然而，對于“自身抗體在疾病發生發展中究竟是始動因素還是繼發反應”這一問題一直存在爭議。為探討自身抗體機制的新思路，劉玲等研究人員采用細胞內PCR擴增的方法，選擇100例（男48例，女52例，平均年齡21歲，平均病程兩個月）進展期白癜風患者血樣，通過PCR1反轉錄、擴增輕鏈和重鏈可變區基因、Cre重組酶介導、單個細胞內輕重連接獲取體內原始配對信息，以及經振蕩篩選等系列技術處理后，成功地構建出一庫容量為3×106的白癜風噬菌體抗體庫。

該抗體庫經抗體表達、特異性檢測及吸附篩選等檢驗，結果顯示：細胞內PCR擴增ScFv基因，目的條帶為800bp，與預期大小相符；取20個單菌落提取質粒進行凝膠電泳，19個可見800bp目的條帶，重組率達95%。通過4輪“親和吸附-洗脫-擴增”篩選，特異性噬菌體抗體回收率增加約67倍，并獲得1株特異性針對黑素細胞膜抗原的抗體。提示抗體庫具有重組率高、特異性強、親和力好、抗體基因信息準確等特點。研究人員認為，細胞內PCR技術，是一種全新的擴增抗體可變區基因方法，它在同一個載體上的輕鏈與重鏈的配對，不是人工隨機組合，而是在體內的原始配對，從人免疫細胞中擴增體內親本配對的單鏈抗體可變區基因，克隆到噬菌體載體，同時利用完整細胞篩選特異性針對黑素細胞膜抗原的自身抗體，從而得到編碼疾病相關抗體基因的準確信息。采用該技術能從分子水平上闡述自身抗體的產生機制、編碼基因規律及基因突變特點。

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