益氣補腎方對老年氣虛腎虛證患者免疫功能的影響

　　近年來大量研究表明，免疫功能紊亂是老年人易患感染、腫瘤等老年病的重要原因〔1，2〕。中醫學認為，腎氣虧虛是老年性病變的內在根據，氣血虛弱是老年性病變的重要因素，腎虛與老年病關系密切。我們以益氣補腎方治療老年氣虛腎虛證患者并測定與之相關的多項免疫指標，并與對照組進行比較，旨在觀察老年氣虛腎虛證患者的免疫功能狀況及益氣補腎方對其調節作用。

　　目的：觀察老年氣虛腎虛證患者的免疫功能狀況及益氣補腎方對其的調節作用。方法：60例老年氣虛腎虛患者被隨機分為兩組，治療組和對照組各30例，治療組以益氣補腎方治療，療程30 d，檢測T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞(NK細胞)、B細胞、免疫球蛋白、補體、淋巴細胞非組蛋白圖像分析(Ag�睳ors)等免疫指標于用藥前后的表達情況，與對照組進行比較。結果：益氣補腎方能顯著提高老年氣虛腎虛證患者的CD3、CD4、CD4/CD8值，提高NK細胞、Ag�睳ors水平，對免疫球蛋白、補體、B細胞無明顯影響。結論：益氣補腎方對與老年氣虛腎虛證相關的免疫紊亂有較好的調節作用，尤其是細胞免疫，對體液免疫無明顯影響。

　　1 對象與方法

　　1��1 對象 本研究入選病例共60例，均為2004年11月～2005年5月解放軍總醫院中醫科高干門診患者。其中男51例、女9例；年齡61～83(73��12±4��54)歲；包括高血壓、冠心病17例，房顫5例，腦梗死11例，糖尿病11例，惡性腫瘤5例，輕度腎功能不全5例，白細胞減少癥3例，帕金森綜合征3例。

　　1��2 病例選擇標準

　　1��2��1 納入標準 根據中華人民共和國衛生部頒布的《中藥新藥臨床研究指導原則》〔3〕和《中醫虛證辨證參考標準》〔4〕中關于氣虛、腎虛的診斷標準。年齡在60歲以上，男女不限；符合以下氣虛和腎虛的主癥各3項以上。氣虛主癥：神疲乏力、氣短、懶言、自汗。腎虛主癥：腰膝酸軟、足跟痛、耳鳴耳聾、尿后余瀝。舌象、脈象單獨記錄，未列入主證之中。

　　1��2��2 排除標準 不符合“氣虛、腎虛”證診斷標準；不能按要求服藥、復診并完成療程者；有免疫系統疾病患者；合并肝腎、造血系統等嚴重原發性疾病及精神病患者；病情危重，難以對藥物的有效性和安全性作出正確評價者。

　　1��3 分組方法 采用完全隨機設計方法，分為治療組、對照組2組，各30例，除西藥治療外，治療組服用益氣補腎方治療，對照組不服用中藥治療。兩組患者在年齡、性別、病種、西藥治療方面保持均衡，統計學無顯著差異。完全隨機法：先將信封依次編為1至60號，然后從隨機化分組表上抄錄60個隨機數字。令隨機數字的單數代表甲組，雙數(0也作為雙數)代表乙組。將確定的組別寫在信封上，患者就診時隨機挑選信封入組。

　　1��4 藥物制備及給藥方法

　　1��4��1 益氣補腎方制備 由解放軍總醫院中藥房提供中草藥，藥物組成為生黃芪、女貞子、肉蓯蓉、黃精等，由解放軍軍事醫學科學院中藥制劑室水提噴霧干燥制粒。

　　1��4��2 給藥方法 所有觀察病例保持西藥治療基本穩定，并于治療前1個月停服一切治療本病的其他中藥。治療組服用自制中藥，對照組不服用任何中藥治療。治療組每日早、晚2次空腹口服，每次2袋，療程30 d。

　　1��5 試驗所用主要試劑、儀器及方法

　　1��5��1 T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞 應用美國Becton Dickion公司生產的FACSort Calibur型流式細胞儀及試劑IgGγ1�睩ITC/IgGγ2a�睵E，CD3�睩ITC /CD4�睵E，CD3�睩ITC /CD8�睵E，CD3�睩ITC /CD19�睵E，CD3�睩ITC /CD56+16�睵E,FACS Lysing Solution溶血素。將細胞染色30 min，溶血10 min，3 000 r/min離心5 min棄上清，PBS洗兩次，上機檢測。運行Cellquest軟件，進行樣品測定分析。

　　1��5��2 免疫球蛋白、補體 應用免疫比濁法。用抗人免疫球蛋白抗體、抗人補體C3、C4抗體和樣品中免疫球蛋白、補體C3、C4相結合，利用動力學原理觀察單位時間內抗原與抗體結合的量來測定其濃度。采集的容器是一次性含分離膠的真空采血管，血液標本必需添加劑是分離膠。將編好號的試管，以3 000 r/min離心3 min，取出標本后去掉蓋子，Beckman公司的IMMAGE特種蛋白分析儀將編好號的試管加入試管架的規定位置，放在儀器相應的標本位置，上機檢測，運行軟件進行樣品測定分析。

　　1��5��3 Ag�睳ORs 應用北京健爾康公司生產的KL型腫瘤免疫圖像分析儀及RPMI1640培養液，GIBCO產品，銀染液(5%硝酸銀)、固定液及其他配套試劑。在無菌條件下取0��5 ml抗凝血加到含RPMI1640培養液的瓶中，置37℃培養箱中72 h后，加2滴終止液，繼續培養2 h后取出。將培養的細胞懸液輕輕混勻并吸到5 ml離心管中，1 000 r/min離心10 min；棄上清液后加入5 ml低滲液，混勻置37℃ 20 min；加5 ml固定液，混勻、離心后棄上清，重復1次；沉淀中加0��3 ml固定液，取2～3滴于預冷的玻片上，晾干。90℃水浴箱上置鋁板，玻片置其上，熱后加染液A 4滴，染液B 2滴，蓋玻片，涂片成深黃色時取下，凈水沖凈，自然晾干。將染片置于顯微鏡載物臺上，對焦，啟動分析程序。計算30個T淋巴細胞核仁銀染面積與細胞核面積比值。

　　1��6 統計學處理 數據采用STATA7��0軟件包進行統計分析。所有試驗指標中的計量資料均用x±s表示，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。

　　2 結果

　　2��1 對老年氣虛腎虛證患者T淋巴細胞亞群的影響 老年氣虛腎虛證患者在治療前CD3低于健康人群參考區間，CD4、CD8、CD4/CD8在健康人群參考區間之內，但CD4處于低限水平。應用益氣補腎方治療后CD3、CD4亞群較治療前有明顯提高(P＜0��05)，CD8有上升趨勢，但無統計學差異，CD4/CD8較治療前有明顯提高(P＜0��05)，治療后治療組CD3、CD4、CD4/CD8值明顯高于對照組(P＜0��05)，對照組治療前后無明顯變化(P＞0��05)，見表1。

　　2��2 對老年氣虛腎虛證患者NK細胞、B細胞和Ag�睳ors的影響 老年氣虛腎虛證患者NK、B細胞和Ag�睳ors水平都在正常健康人群參考區間之內，Ag�睳ors和NK細胞處于低限水平，通過益氣補腎方治療Ag�睳ors和NK細胞表達明顯提高(P＜0��05)，B細胞水平有上升趨勢，但無統計學差異(P＞0��05)。治療后治療組Ag�睳ors和NK細胞明顯高于空白對照組(P＜0��05)，對照組治療前后無明顯變化(P＞0��05)，見表1。

　　2��3 對老年氣虛腎虛證患者免疫球蛋白和補體的影響 老年氣虛腎虛證患者IgA 、IgG 、IgM及補體C3、C4水平都在正常健康人群參考區間之內。通過益氣補腎方治療IgA 、IgG 、IgM及補體C3、C4水平較治療前均有所下降，但均無統計學差異(P＞0��05)。對照組治療前后無明顯差異，見表2。

　　表1 治療前后T淋巴細胞亞群、NK細胞、B 細胞測定結果（略）

　　與治療前比較:1)P＜0��05;與對照組比較:2)P＜0��05

　　表2 治療前后免疫球蛋白IgA 、IgG 、IgM和補體C3、C4測定結果（略）

　　與治療前比較: 均P＞0��05

　　3 討論

　　中醫學認為衰老的原因在于五臟虛損,其中重要的機制在于腎精虧虛。隨增齡人的五臟功能逐漸虛減，導致后天臟腑之精不斷虛衰，臟腑功能的減退，后天臟腑之精的虛衰是腎精虧虛的直接因素。益氣補腎方由生黃芪、女貞子、肉蓯蓉、黃精等組成，方中生黃芪為補氣之代表藥，為補藥之長，對人體的氣血陰陽能兼而調之。女貞子、肉蓯蓉，黃精與生黃芪配伍共奏補益肝腎、調達氣血之功，使氣血雙補、陰陽兼顧，諸臟虛損得平。

　　本研究證實老年氣虛腎虛證患者的免疫紊亂主要表現為細胞免疫功能顯著下降，這與國內文獻報道相符〔5〕，其中T細胞亞群、T細胞活化功能等均發生了顯著改變，CD3、CD4、CD4/CD8、Ag�睳ors均有所減低。應用益氣補腎方治療后CD3、CD4、CD4/CD8、Ag�睳ors較治療前均有明顯提高(P＜0��05)。非特異性免疫也有所減低，表現為NK細胞水平較低，通過益氣補腎方治療NK細胞表達明顯提高(P＜0��05)，這與許得盛〔6〕報道一致。體液免疫變化不明顯，經檢測老年氣虛腎虛證患者IgA 、IgG 、IgM、補體C3、C4及B細胞水平都在正常健康人群參考區間之內。通過益氣補腎方治療IgA 、IgG、IgM及補體C3、C4水平較治療前均有所下降，B細胞水平有所提高，但均無統計學差異(P＞0��05)，這與張戰平報道〔7〕不同，可能與樣本數量及采集人群不同有關，有待深入研究。

　　本研究揭示了益氣補腎方對老年氣虛腎虛證相關免疫功能紊亂的部分作用機理，更深層次的機制有待進一步的探討。

　　參考來源：《中國老年學雜志》2006年5月26卷5期；《益氣補腎方對老年氣虛腎虛證患者免疫功能的影響》；呼健 楊明會 路軍章

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